由福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所承擔(dān)的省科技計(jì)劃項(xiàng)目“轉(zhuǎn)基因水稻的快速檢測(cè)技術(shù)研究”通過(guò)了省科技廳組織的專家驗(yàn)收。
該項(xiàng)目選取了BT類抗蟲(chóng)基因cry1Ac、cry1Ca、cry30FAa1基因，以及豇豆胰蛋白酶抑制劑基因cpti與潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記基因hpt，構(gòu)建細(xì)菌表達(dá)載體并純化了目的蛋白，制備了Cry1Ac、Cry1Ca、Hpt、CPTI蛋白的多克隆抗體，進(jìn)行了Cry1Ab、Cry1Ac、Hpt蛋白的單克隆抗體制備。
建立了膠體金標(biāo)記檢測(cè)試紙條技術(shù)體系，針對(duì)試紙條制備中膠體金顆粒的大小，膠體金標(biāo)記蛋白最適用量與pH值，不同膜材的選擇，試紙條規(guī)格，包被液與膠體金重懸液組分等進(jìn)行了優(yōu)化，探索了最佳制備工藝，制備了Cry1Ac、Cry1Ca與CPTI的轉(zhuǎn)基因檢測(cè)試紙條，并制訂了試紙條中試生產(chǎn)技術(shù)資料與檢測(cè)說(shuō)明書(shū)。
通過(guò)該技術(shù)制備的膠體金試紙條檢測(cè)轉(zhuǎn)cry1Ac與cpti基因水稻植株，與ELISA結(jié)果比較發(fā)現(xiàn)，Cry1Ac試紙條靈敏度為96.0%，特異性為100%，符合率為96.1%；CPTI試紙條靈敏度為91.8%，特異性為94.8%，符合率為93.0%。為轉(zhuǎn)基因水稻選育過(guò)程中的檢測(cè)奠定基礎(chǔ)。 |
