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lonza 特殊 無血清 培養(yǎng)基

http://bitebo.com/a/gb2312/gongsixinxi/shichanghuodong/2013/0331/5024.html

作者：梅 玲

　　【關(guān)鍵詞】 ELISA

　　　　HIV抗體檢測是用于艾滋病防治的一項重要保證措施。因此,提高實驗室檢測的準(zhǔn)確性,減少假陽性和假陰性反應(yīng)的發(fā)生,對監(jiān)測、診斷、血液篩查艾滋病來說是很重要的。為了更準(zhǔn)確、更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)爻鍪緳z測報告，本HIV初篩實驗室在參加省級機構(gòu)室間質(zhì)評的同時，還進行室內(nèi)質(zhì)量控制?，F(xiàn)將本室進行HIV室內(nèi)質(zhì)量控制的程序介紹如下。

　　　　1 試劑來源

　　　　1.1 外部對照質(zhì)控血清

　　　　嚴(yán)格按照《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》2004年版【1】制備弱陽性對照血清、保存。

　　1.2 HIV診斷試劑盒

　　　　由省級HIV實驗室指定使用經(jīng)臨床質(zhì)量評估敏感性和特異性高的試劑。由上海實業(yè)科華生物技術(shù)有限公司提供，所用試劑盒及內(nèi)部對照質(zhì)控血清均在有效期內(nèi)使用。

　　　　2 實驗室設(shè)備校準(zhǔn)

　　　　2.1 anthos fluido24-600型自動酶標(biāo)洗板機

　　　　本室根據(jù)計量認(rèn)證質(zhì)量手冊的要求，嚴(yán)格按照作業(yè)指導(dǎo)書操作規(guī)程進行自校準(zhǔn)，并詳細(xì)填寫原始記錄，有自校準(zhǔn)報告。

　　　　2.2 恒溫水浴箱

　　　　調(diào)節(jié)并控制溫度在37℃±2℃之間。

　　　　2.3 微量加樣器（Finnpipette）、酶標(biāo)儀（Reader2010）

　　　　均經(jīng)省技術(shù)監(jiān)督檢測中心檢定合格，并在檢定周期一年內(nèi)使用，本室嚴(yán)格按照質(zhì)量手冊中作業(yè)指導(dǎo)書的操作規(guī)程對微量加樣器定期進行期間核查，對酶標(biāo)儀檢測數(shù)據(jù)進行不確定度分析，從而確保其具有良好的重復(fù)性和線性范圍。

　　　　3 操作

　　　　(1)嚴(yán)格按照計量認(rèn)證質(zhì)量手冊中作業(yè)指導(dǎo)書的操作規(guī)程進行操作。加入樣品量要準(zhǔn)確，不得混入血細(xì)胞，同時每板設(shè)陰、陽性對照各2孔，空白對照1孔，質(zhì)控弱陽性對照血清1孔；震搖15s，37±2℃孵育60±5min（嚴(yán)格掌握溫育時間，以免影響結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確性）；置自動洗板機上洗滌，洗板時應(yīng)保證洗板機管路暢通，加液量均勻；不得隨意加減洗板次數(shù)（洗板次數(shù)少出現(xiàn)假陽性，洗板次數(shù)多又會使臨界弱陽性變成陰性而漏檢）；拍板（以墊紙不濕為宜）；在2h內(nèi)置于酶標(biāo)儀讀數(shù)，雙波長450/630nm測OD值。試劑固定同一廠家，購入試劑同時索要廠家的中國藥品生物制品檢定所批檢合格復(fù)印件，以保證所用試劑質(zhì)量，不同批號試劑不得混用。嚴(yán)格按照本中心計量認(rèn)證手冊規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進行操作。

　　(2)在常規(guī)條件下，對同一批外部對照質(zhì)控血清連續(xù)測定20次，獲得一組S/CO值，求均數(shù)()和標(biāo)準(zhǔn)差(s), 超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。將均值()和標(biāo)準(zhǔn)差(s)分別在質(zhì)控框架圖中標(biāo)示出來。以S/CO值作縱坐標(biāo)(Y軸)，每一次試驗作橫坐標(biāo)(x軸)，繪制質(zhì)控圖。從第21次起，將每次質(zhì)控血清的檢測結(jié)果依次點入該質(zhì)控框架圖中，檢驗進入質(zhì)控狀態(tài)。每一次實驗必須使用外部對照質(zhì)控血清，以便監(jiān)控實驗的重復(fù)性和穩(wěn)定性。同時可以了解各批試劑盒的批間或孔間差異，繪制質(zhì)量控制圖。質(zhì)控圖是把檢測數(shù)據(jù)與已確定的 “控制限”進行比較的圖，圖中為靶值線、±2S線為警告線，±3S為失控線。并按時間順序點入本實驗室每次實驗質(zhì)控血清的測定值，觀察其是否在允許范圍內(nèi)，月底計算當(dāng)月全部質(zhì)量控制血清檢測結(jié)果的S和CV，并進行圖形分析和小結(jié)，然后將質(zhì)控圖存檔保存。

　　　　4 討論

　　　　(1)室內(nèi)質(zhì)控是實驗室內(nèi)部對所有影響檢測質(zhì)量的各個環(huán)節(jié)進行系統(tǒng)控制，目的是控制本實驗室常規(guī)工作的精密度，提高常規(guī)工作前后的一致性。在ELISA法檢測HIV試驗中，當(dāng)質(zhì)控血清的S/CO值波動在 +2S范圍內(nèi)，表明工作正常，結(jié)果可靠，若超過 +2S范圍時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，及時分析原始數(shù)據(jù)，對具體檢驗過程進行回顧性分析，查找原因后給予糾正并重復(fù)測試，若超過 +3S范圍時，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實驗結(jié)果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機誤差或外部對照滴度下降造成。

　　　　(2)引起室內(nèi)質(zhì)控失控的原因很多。如：換用新批號診斷試劑盒或標(biāo)準(zhǔn)血清、儀器設(shè)備未經(jīng)檢定、校準(zhǔn)或測試、溫育時間和溫度不準(zhǔn)確、新的檢驗人員、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)血清反復(fù)凍融等，此時要及時查找原因予以糾正。

　　　　(3)月底計算當(dāng)月測定結(jié)果的S和CV，并與其他月份同一批號質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)血清所得S和CV相比較，通過圖形資料對比進行誤差分析，從而發(fā)現(xiàn)常規(guī)檢測的精密性和準(zhǔn)確性是否發(fā)生了變化。

　　　　(4)所用的質(zhì)控弱陽性對照血清為低溫冷凍保存的液體，使用時要融化徹底并充分混勻，達(dá)到室溫方可使用。室內(nèi)質(zhì)量控制是通過對質(zhì)控弱陽性對照血清的檢測和分析，推斷和控制常規(guī)標(biāo)本的檢測質(zhì)量，因此，質(zhì)控弱陽性對照血清與檢測標(biāo)本必須同等對待。每天檢測結(jié)束后，檢測者應(yīng)把當(dāng)天質(zhì)控弱陽性對照血清測定結(jié)果畫在圖上，確定在允許范圍內(nèi)，方可發(fā)出標(biāo)本檢測報告，這樣做可使檢測者及時分析質(zhì)量控制圖中出現(xiàn)的各種問題，采取相應(yīng)措施。

　　　　(5)通常把臨界值上下10％的范圍定為檢測結(jié)果灰區(qū)。對于檢測過程中出現(xiàn)的灰區(qū)標(biāo)本均應(yīng)進行重復(fù)測試，以減少假陽性和假陰性結(jié)果的出現(xiàn)，并對實驗結(jié)果和過程進行記錄并存檔保存。

　　　　(6)要做好實驗室的質(zhì)量保證，單純靠室內(nèi)質(zhì)控是不行的，還要建立健全實驗室的各項規(guī)章制度，掌握質(zhì)量控制知識，做好預(yù)防性質(zhì)量控制，保證標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量等全過程的質(zhì)量控制，從而提高檢驗質(zhì)量。

　　【參考文獻(xiàn)】

　　　　1 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范.中國疾病預(yù)防控制中心，2004，12.

　　　　作者單位： 563000 貴州遵義，遵義市紅花崗區(qū)疾病預(yù)防控制中心

　　　　【中圖分類號】 R181.9

　　　　HIV抗體檢測是用于艾滋病防治的一項重要保證措施。因此,提高實驗室檢測的準(zhǔn)確性,減少假陽性和假陰性反應(yīng)的發(fā)生,對監(jiān)測、診斷、血液篩查艾滋病來說是很重要的。為了更準(zhǔn)確、更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)爻鍪緳z測報告，本HIV初篩實驗室在參加省級機構(gòu)室間質(zhì)評的同時，還進行室內(nèi)質(zhì)量控制?，F(xiàn)將本室進行HIV室內(nèi)質(zhì)量控制的程序介紹如下。

　　　　1 試劑來源

　　　　1.1 外部對照質(zhì)控血清

　　　　嚴(yán)格按照《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》2004年版【1】制備弱陽性對照血清、保存。

　　1.2 HIV診斷試劑盒

　　　　由省級HIV實驗室指定使用經(jīng)臨床質(zhì)量評估敏感性和特異性高的試劑。由上海實業(yè)科華生物技術(shù)有限公司提供，所用試劑盒及內(nèi)部對照質(zhì)控血清均在有效期內(nèi)使用。

　　　　2 實驗室設(shè)備校準(zhǔn)

　　　　2.1 anthos fluido24-600型自動酶標(biāo)洗板機

　　　　本室根據(jù)計量認(rèn)證質(zhì)量手冊的要求，嚴(yán)格按照作業(yè)指導(dǎo)書操作規(guī)程進行自校準(zhǔn)，并詳細(xì)填寫原始記錄，有自校準(zhǔn)報告。

　　　　2.2 恒溫水浴箱

　　　　調(diào)節(jié)并控制溫度在37℃±2℃之間。

　　　　2.3 微量加樣器（Finnpipette）、酶標(biāo)儀（Reader2010）

　　　　均經(jīng)省技術(shù)監(jiān)督檢測中心檢定合格，并在檢定周期一年內(nèi)使用，本室嚴(yán)格按照質(zhì)量手冊中作業(yè)指導(dǎo)書的操作規(guī)程對微量加樣器定期進行期間核查，對酶標(biāo)儀檢測數(shù)據(jù)進行不確定度分析，從而確保其具有良好的重復(fù)性和線性范圍。

　　　　3 操作

　　　　(1)嚴(yán)格按照計量認(rèn)證質(zhì)量手冊中作業(yè)指導(dǎo)書的操作規(guī)程進行操作。加入樣品量要準(zhǔn)確，不得混入血細(xì)胞，同時每板設(shè)陰、陽性對照各2孔，空白對照1孔，質(zhì)控弱陽性對照血清1孔；震搖15s，37±2℃孵育60±5min（嚴(yán)格掌握溫育時間，以免影響結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確性）；置自動洗板機上洗滌，洗板時應(yīng)保證洗板機管路暢通，加液量均勻；不得隨意加減洗板次數(shù)（洗板次數(shù)少出現(xiàn)假陽性，洗板次數(shù)多又會使臨界弱陽性變成陰性而漏檢）；拍板（以墊紙不濕為宜）；在2h內(nèi)置于酶標(biāo)儀讀數(shù)，雙波長450/630nm測OD值。試劑固定同一廠家，購入試劑同時索要廠家的中國藥品生物制品檢定所批檢合格復(fù)印件，以保證所用試劑質(zhì)量，不同批號試劑不得混用。嚴(yán)格按照本中心計量認(rèn)證手冊規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進行操作。

　　(2)在常規(guī)條件下，對同一批外部對照質(zhì)控血清連續(xù)測定20次，獲得一組S/CO值，求均數(shù)()和標(biāo)準(zhǔn)差(s), 超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。將均值()和標(biāo)準(zhǔn)差(s)分別在質(zhì)控框架圖中標(biāo)示出來。以S/CO值作縱坐標(biāo)(Y軸)，每一次試驗作橫坐標(biāo)(x軸)，繪制質(zhì)控圖。從第21次起，將每次質(zhì)控血清的檢測結(jié)果依次點入該質(zhì)控框架圖中，檢驗進入質(zhì)控狀態(tài)。每一次實驗必須使用外部對照質(zhì)控血清，以便監(jiān)控實驗的重復(fù)性和穩(wěn)定性。同時可以了解各批試劑盒的批間或孔間差異，繪制質(zhì)量控制圖。質(zhì)控圖是把檢測數(shù)據(jù)與已確定的 “控制限”進行比較的圖，圖中為靶值線、±2S線為警告線，±3S為失控線。并按時間順序點入本實驗室每次實驗質(zhì)控血清的測定值，觀察其是否在允許范圍內(nèi)，月底計算當(dāng)月全部質(zhì)量控制血清檢測結(jié)果的S和CV，并進行圖形分析和小結(jié)，然后將質(zhì)控圖存檔保存。

　　　　4 討論

　　　　(1)室內(nèi)質(zhì)控是實驗室內(nèi)部對所有影響檢測質(zhì)量的各個環(huán)節(jié)進行系統(tǒng)控制，目的是控制本實驗室常規(guī)工作的精密度，提高常規(guī)工作前后的一致性。在ELISA法檢測HIV試驗中，當(dāng)質(zhì)控血清的S/CO值波動在 +2S范圍內(nèi)，表明工作正常，結(jié)果可靠，若超過 +2S范圍時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，及時分析原始數(shù)據(jù)，對具體檢驗過程進行回顧性分析，查找原因后給予糾正并重復(fù)測試，若超過 +3S范圍時，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實驗結(jié)果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機誤差或外部對照滴度下降造成。

　　　　(2)引起室內(nèi)質(zhì)控失控的原因很多。如：換用新批號診斷試劑盒或標(biāo)準(zhǔn)血清、儀器設(shè)備未經(jīng)檢定、校準(zhǔn)或測試、溫育時間和溫度不準(zhǔn)確、新的檢驗人員、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)血清反復(fù)凍融等，此時要及時查找原因予以糾正。

　　　　(3)月底計算當(dāng)月測定結(jié)果的S和CV，并與其他月份同一批號質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)血清所得S和CV相比較，通過圖形資料對比進行誤差分析，從而發(fā)現(xiàn)常規(guī)檢測的精密性和準(zhǔn)確性是否發(fā)生了變化。

　　　　(4)所用的質(zhì)控弱陽性對照血清為低溫冷凍保存的液體，使用時要融化徹底并充分混勻，達(dá)到室溫方可使用。室內(nèi)質(zhì)量控制是通過對質(zhì)控弱陽性對照血清的檢測和分析，推斷和控制常規(guī)標(biāo)本的檢測質(zhì)量，因此，質(zhì)控弱陽性對照血清與檢測標(biāo)本必須同等對待。每天檢測結(jié)束后，檢測者應(yīng)把當(dāng)天質(zhì)控弱陽性對照血清測定結(jié)果畫在圖上，確定在允許范圍內(nèi)，方可發(fā)出標(biāo)本檢測報告，這樣做可使檢測者及時分析質(zhì)量控制圖中出現(xiàn)的各種問題，采取相應(yīng)措施。

　　　　(5)通常把臨界值上下10％的范圍定為檢測結(jié)果灰區(qū)。對于檢測過程中出現(xiàn)的灰區(qū)標(biāo)本均應(yīng)進行重復(fù)測試，以減少假陽性和假陰性結(jié)果的出現(xiàn)，并對實驗結(jié)果和過程進行記錄并存檔保存。

　　　　(6)要做好實驗室的質(zhì)量保證，單純靠室內(nèi)質(zhì)控是不行的，還要建立健全實驗室的各項規(guī)章制度，掌握質(zhì)量控制知識，做好預(yù)防性質(zhì)量控制，保證標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量等全過程的質(zhì)量控制，從而提高檢驗質(zhì)量。

　　【參考文獻(xiàn)】

　　　　1 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范.中國疾病預(yù)防控制中心，2004，12.

　　　　作者單位： 563000 貴州遵義，遵義市紅花崗區(qū)疾病預(yù)防控制中心