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Crispr基因敲除細(xì)胞系構(gòu)建主要實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目服務(wù)

作者：admin 來源：本站發(fā)布時(shí)間： 2017-10-31 21:34　瀏覽次數(shù)：

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Crispr基因敲除細(xì)胞系構(gòu)建主要實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目服務(wù)
序號(hào)	服務(wù)項(xiàng)目	具體描述	單價(jià)(元)	實(shí)驗(yàn)周期	備注
2	Crispr引物設(shè)計(jì)	每個(gè)基因設(shè)計(jì)2-3對(duì)引物	300	4天	包含引物設(shè)計(jì)、合成費(fèi)用
3	gRNA質(zhì)粒構(gòu)建	一對(duì)引物退火，用T4連接酶將其連接到gRNA載體中	900	1周	包含載體酶切、引物退火、T4連接、轉(zhuǎn)化涂板
4	gRNA質(zhì)粒提取	從菌液中提取gRNA質(zhì)粒，測(cè)序	1200	3天	包含菌液接種、質(zhì)粒提取，測(cè)序驗(yàn)證，無內(nèi)毒素質(zhì)粒提取
5	細(xì)胞培養(yǎng)	目的細(xì)胞的培養(yǎng)，以備細(xì)胞轉(zhuǎn)染等操作	400	1周	包含細(xì)胞培養(yǎng)、傳代及凍存
6	慢病毒包裝與感染	在HEK293T細(xì)胞中將構(gòu)建好的cas9-gRNA表達(dá)質(zhì)粒包裝成慢病毒后感染目的細(xì)胞	3000	2周	包含慢病毒包裝效率的優(yōu)化
7	抗性篩選	利用抗性篩選轉(zhuǎn)染陽性的細(xì)胞	3800	1-2周	包含抗性使用濃度和時(shí)間的優(yōu)化
8	測(cè)序檢測(cè)敲除效率	細(xì)胞基因組提取，PCR出靶序列，測(cè)序檢測(cè)	1300	1周	包含基因組提取，目的基因PCR和測(cè)序
9	分單克隆細(xì)胞	將抗性篩選后得到的細(xì)胞利用有限稀釋法分到96孔板中，獲得單克隆細(xì)胞	1400	2天	包含細(xì)胞消化、細(xì)胞計(jì)數(shù)、96孔板分單克隆
10	單克隆細(xì)胞培養(yǎng)傳代	培養(yǎng)96孔板中的細(xì)胞，挑選由單個(gè)細(xì)胞長成的細(xì)胞群落傳代擴(kuò)增	5000	3-5周	包含單克隆細(xì)胞挑選、細(xì)胞傳代擴(kuò)增
11	基因敲除細(xì)胞株鑒定	WB檢測(cè)單克隆細(xì)胞中目的基因的剩余表達(dá)量	1600	1-2周	包含20個(gè)單克隆細(xì)胞株樣品制備，WB檢測(cè)目的基因和內(nèi)參
12	基因敲除細(xì)胞系凍存	擴(kuò)增并凍存基因敲除細(xì)胞系	1000	1周	包含細(xì)胞擴(kuò)增及凍存
總計(jì)（元）			19900	6-8周	/
說明：Crispr敲除實(shí)驗(yàn)有一定的風(fēng)險(xiǎn)，我們會(huì)先做項(xiàng)目分析，比較有把握才會(huì)開展后續(xù)實(shí)驗(yàn)，一般會(huì)選取2-3個(gè)靶點(diǎn)來做，抗性篩選完后確定效率最高的來篩選單克隆細(xì)胞株

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